微量分光光度計(jì)主要用于核酸及蛋白質(zhì)的濃度測(cè)定和純度評(píng)估。然而，在實(shí)際應(yīng)用中，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)核酸較容易被準(zhǔn)確測(cè)量，而蛋白質(zhì)樣品的濃度測(cè)量偏差較大的情況。很多用戶也困惑于此，同樣是基于紫外吸收的檢測(cè)，為何兩種樣品的檢測(cè)性能會(huì)有差異呢？

    坊間也時(shí)常出現(xiàn)一些說法：微量只能用于測(cè)核酸，而蛋白測(cè)不準(zhǔn)。如果真是這樣的話，那么設(shè)備的使用率就會(huì)大打折扣了。傳聞是不可輕信的，我們還是需要了解原因，然后才能找出解決方案。

    蛋白質(zhì)樣品，相較于核酸而言，更容易出現(xiàn)表面張力降低的情況。因此，如果你的微量分光光度計(jì)是采用樣品拉伸原理的，即形成液柱的方法，對(duì)于一些樣品而言，是難以進(jìn)行測(cè)量的，這可能是造成測(cè)量準(zhǔn)確性和重復(fù)性不好的大原因。

影響因素一：溫度和揮發(fā)

    通常來說，液體的溫度升高，由于分子間引力減弱，表面張力會(huì)隨之降低。這也解釋了為何低溫保存的核酸樣品，張力較大，更易形成液柱。在夏天實(shí)驗(yàn)環(huán)境較熱，或者制藥用戶的恒溫恒濕實(shí)驗(yàn)室，溫度是相對(duì)較高的，張力會(huì)隨之下降。

影響因素二：鹽

    無(wú)機(jī)鹽作為一種非表面活性劑，具有水合作用，趨向于把水分子拖入水中,因此會(huì)增大表面張力，反之亦然。因此，脫鹽或低鹽的樣品，表面張力會(huì)降低，常見于蛋白純化的流程。例如在進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析或質(zhì)譜分析時(shí)，樣品需經(jīng)過脫鹽處理，這樣的樣品在進(jìn)行濃度測(cè)量時(shí)，并不容易形成液柱。

    蛋白提取過程中經(jīng)常使用的表面活性劑（清潔劑），如SDS、Triton X100，以及在發(fā)酵過程中加入的消泡劑等成份，會(huì)大幅降低樣品的表面張力（想想看，連維持泡沫的張力都沒有了），這些物質(zhì)常會(huì)殘留在樣本中，難以完全去除。因此，在工藝過程中測(cè)量蛋白樣品，是一項(xiàng)挑戰(zhàn)。

    當(dāng)使用移液器將微量樣品加載到點(diǎn)樣臺(tái)后，會(huì)出現(xiàn)液體與固體的接觸表面，點(diǎn)樣臺(tái)表面的親水/疏水性質(zhì)會(huì)影響液體的表面張力。因此，使用拉伸法的主流品牌微量分光光度計(jì)，點(diǎn)樣臺(tái)表面具有疏水性涂層，會(huì)增大液體的張力。但是，隨著使用損耗，涂層會(huì)逐漸消耗，需要定期使用試劑進(jìn)行維護(hù)和再生。在正確的維護(hù)之后，這一影響因素也隨之消失，但也增加了維護(hù)成本，而大多數(shù)用戶并不知道這一點(diǎn)。

我們換個(gè)思維，如果一臺(tái)微量分光光度計(jì)的測(cè)量原理，并不依賴于液體的表面張力呢？Implen就可以，采用樣品壓縮技術(shù)的Nanophotometer?檢測(cè)時(shí)無(wú)需形成液柱，而是將液滴壓縮為很薄的液膜。因此，無(wú)論核酸、蛋白，都可以使用Nanophotometer?輕松測(cè)量。而封閉式的檢測(cè)環(huán)境，也很好的保護(hù)了樣品免受揮發(fā)影響。